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AN0028 利用色譜-質譜法快速、簡單、精確地檢測尿樣中的濫用藥物及其定量分析
來源:IMCS | 作者:Ana Celia Grenier, Ph.D | 發布時間: 181天前 | 431 次瀏覽 | 分享到:
對濫用藥物的監測變得日趨重要。通常情況下,患者樣本首先經過免疫檢測法進行篩選,然后再通過質譜進行定性及定量檢測。目前研究人員專注于開發一種降低成本,同時提高檢測準確性的方法,高分辨質譜(HRMS),尤其是Q-ExactiveTM在這方面得到廣泛的應用。
本研究建立了一種可同時篩選及監測47種藥物的LC-HRMS聯合獨立數據采集(DIA)方法。同時,應用IMCSzyme?—一種生物工程改良的β-葡萄糖醛酸酶對樣本進行水解。IMCSzyme?能夠高效水解大多數藥物,同時降低假陰性率。IMCSzyme?為純凈的酶溶液,可減少對系統的污染。


概述

對濫用藥物的監測變得日趨重要。通常情況下,患者樣本首先經過免疫檢測法進行篩選,然后再通過質譜進行定性及定量檢測。目前研究人員專注于開發一種降低成本,同時提高檢測準確性的方法,高分辨質譜(HRMS),尤其是Q-ExactiveTM在這方面得到廣泛的應用。

本研究建立了一種可同時篩選及監測47種藥物的LC-HRMS聯合獨立數據采集(DIA)方法。同時,應用IMCSzyme?—一種生物工程改良的β-葡萄糖醛酸酶對樣本進行水解。IMCSzyme?能夠高效水解大多數藥物,同時降低假陰性率。IMCSzyme?為純凈的酶溶液,可減少對系統的污染。

材料與方法

1.      樣本準備:75 μL尿液+300 μL水解復合物(5000 U/mL IMCSzyme?,快速水解緩沖液及47個內標)。于65進行水解60分鐘。4000 rpm離心7分鐘即上樣于LC-MS/MS

2.      標準及質控樣品與樣本同時準備,并用來制備標準曲線。

3.      儀器:Waters Acquity UPLC I-ClassPoroshell 120 SB-C18 column, 2.1 mm x 50 mm with 2.7 micron particle sizeThermo Q-Exactive? Hybrid Quadrupole-Orbitrap Mass Spectrometer

結果

實驗比較了數據非獨立采集(DDA-MS2)及數據獨立采集(DIA-MS2)方法,DIA更適合于對于收集一個以上的70000分辨強度的分析物,且無干擾信號。校正系數大于0.99。對照樣本的批內精密度小于20%,批間精密度小于10%(表1)。所有分析物的內標歸一化矩陣因子的相對標準偏差(RSD)均小于14%

實驗優化了IMCSzyme?的水解時間,溫度及濃度等條件,所有分析物均達到80%的水解。尤其是可待因-6-葡萄糖苷酸和嗎啡-6-葡萄糖苷酸是兩種極難水解的代謝物,但用IMCSzyme?可達到大于80%以上的水解效率。

結論

本研究建立并驗證了一種篩選、定量檢測患者尿液濫用藥物的方法。該方法中應用IMCSzyme?對樣本進行快速水解,且水解后的樣本純凈并可提高回收率。將IMCSzyme?DIAQ-Exactive Orbitrap?聯合使用,使得對樣本的篩選、鑒定及定量更加簡便、省時。

1. 方法驗證結果


此項研究為IMCS總結于技術研究報告“Screening and Quantification of Pain and Antidepressant Drugs in Human Urine by Liquid Chromatography-High Resolution Mass Spectrometry”(由Ana Celia Grenier, Ph.D - Dominion Diagnostics發表于2016ASMS會議)。




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