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AN_0006 DPX槍頭式分散固相微萃取柱(DPX tips)及Tecan? 自動移液系統在尿樣藥物代謝產物全自動分析中的應用
來源:DPX | 作者:DPX | 發布時間: 159天前 | 447 次瀏覽 | 分享到:
臨床及毒理實驗室常用液/固相萃取法(SPE)對尿液中藥物進行分析。SPE處理的樣本較為純凈,得到的結果可靠且可延長質譜等儀器的使用壽命。然而SPE方法的成本較高,因此越來越多的科研人員專注于開發使用“dilute and shoot (D/S)”方法獲得高純度樣品。雖然D/S方法比較經濟,且超靈敏,但其會降低LC柱子壽命,需要頻繁的LC-MS/MS維護,樣品需要反復上樣,且數據分析時間較長。


概述


臨床及毒理實驗室常用液/固相萃取法(SPE)對尿液中藥物進行分析。SPE處理的樣本較為純凈,得到的結果可靠且可延長質譜等儀器的使用壽命。然而SPE方法的成本較高,因此越來越多的科研人員專注于開發使用“dilute and shoot (D/S)”方法獲得高純度樣品。雖然D/S方法比較經濟,且超靈敏,但其會降低LC柱子壽命,需要頻繁的LC-MS/MS維護,樣品需要反復上樣,且數據分析時間較長。

分散型萃取槍頭(Dispersive Pipette ExtractionDPX)的出現彌補了傳統SPE方法的缺陷。萃取槍頭中填加了懸散的填料,通過簡單的吸打過程即可完成與樣品的混合。DPX tips能完美地與自動液體移液器聯合使用,使得樣品純化過程變得簡單,其可在10分鐘內同時完成96個樣品的純化。

材料與方法

1.      將酶解的樣品,水,30%甲醇,含有1%甲酸的甲醇加入多孔板中,將多孔板載入TECAN EVO儀器。

2.      一塊板加入200 μL水,另一塊板加入150 μL含有1%甲酸的甲醇,并載入TECAN

3.      安裝將DPX-RP/WAX槍頭,并用30%甲醇潤洗。

4.      DPX槍頭反復吸打水解樣品三次。

5.      吸打水以洗去多余的鹽,尿素和肌氨酸酐。

6.      用小量洗脫液對樣品洗脫并濃縮。

7.      對于LC系統,將洗脫物稀釋以獲得需要的甲醇濃度:加入1050 μL水(總體積為1200 μL12.5%甲醇)。

8.      檢測分析儀器:Thermo TSQ Vantage triple quadrupole instrumentAgilent 1260 HPLC + Agilent Poroshell EC-C18 column (3.0 x 50 mm, 2.7 μm)

結果與討論

檢測結果為線性的,準確可靠。校正系數R2大于0.99,濃度范圍為12.5-400 ng/mL,多數范圍在6.25-800 ng/mL。相對標準偏差(%RSD)在1.7-9.7%之間(4孔重復,400 ng/mL)。檢測限(LODs)為3.3 σ/mσ為最小校正點的標準差,m為曲線斜率。LODs范圍在0.25-12 ng/mL。定量限(LOQs)為10 σ/m,范圍在1.0-60 ng/mL(表1)。

不同的分析方法及LC-MS/MS的敏感性決定著LODsLOQs的結果。為了將敏感性最大化,需要純化更多的尿液樣本,樣品洗脫體積增加到500 μL

結論

時間就是金錢,節省時間就是節約成本。與傳統SPE方法相比,DPX tips聯合高通量自動化系統在節省成本及時間的同時,減少了溶液使用量及廢液量。更純凈的樣品避免了重復上樣,基質干擾及大型昂貴儀器。且純凈的樣品可延長LC-MS/MS的使用壽命。DPX技術與Tecan Freedom EVO自動移液系統聯合使用,可簡便,快速地完成樣品制備,是臨床及毒理實驗室理想的且完美的操作方法。



表1


DPX-RP/WAX tip純化后待測物的回收率。化合物包括:鴉片及鴉片類似物,苯并二氮雜卓類,普遍濫用藥,非鴉片類止痛藥,抗痙攣藥,鎮靜催眠藥,興奮劑,抗抑郁藥及圖中標注的代謝物。

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